摘要：

目的:探讨蟾毒灵对肝细胞生长因子( HGF)诱导的阿法替尼耐药肺癌细胞H1975生长的影响,并分析其可能的作用机制.方法采用外源性HGF和重组HGF腺病毒转染内源性HGF诱导的方法建立阿法替尼耐药的肺癌细胞H1975,应用四甲基偶氮唑蓝( MTT)法检测蟾毒灵,阿法替尼及联合用药对阿法替尼耐药细胞H1975增殖的抑制作用,Transwell实验检测药物对阿法替尼耐药细胞H1975侵袭能力的影响,酶联免疫吸附试验( ELISA)法检测转染后H1975细胞分泌的HGF水平以及药物对HGF分泌水平的影响,Western blot检测药物干预后EGFR,cMet信号通路及上皮细胞?间质转化( EMT)相关蛋白的表达.结果 MTT结果显示,在外源性和内源性HGF刺激下,阿法替尼对H1975细胞生长无抑制作用,经蟾毒灵与阿法替尼联合处理后,可明显抑制肿瘤细胞的生长.Transwell实验结果显示,在外源性HGF作用下,阿法替尼组的穿膜细胞数为(118.92±37.29)个;蟾毒灵组的穿膜细胞数为(88.84±19.53)个;阿法替尼与蟾毒灵联合组的穿膜细胞数为(48.98±11.43)个,与阿法替尼组和蟾毒灵组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05). ELISA结果显示,H1975/HGF细胞(转染重组HGF腺病毒的H1975细胞)分泌高水平的HGF,蟾毒灵和阿法替尼干预后,H1975/HGF细胞分泌HGF水平差异无统计学意义(P>0.05). Western blot结果显示,蟾毒灵联合阿法替尼能明显下调阿法替尼耐药细胞中 p?EGFR,p?cMet,p?AKT,p?ERK,vimentin 和 snail 蛋白的表达,上调E?cadherin蛋白的表达.结论蟾毒灵联合阿法替尼可显著抑制阿法替尼耐药细胞H1975的增殖,阻止H1975肺癌细胞侵袭;蟾毒灵逆转 HGF 诱导的 H1975肺癌细胞对阿法替尼耐药,可能与阻断cMet/PI3K/AKT,cMet/MAPK/ERK信号通路以及阻止EMT进程有关.

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