摘要：

目的筛选金复康口服液和肺癌治疗常用中药的有效单体;明确金复康组分重楼皂苷Ⅶ对肺癌发病核心病机"正虚伏毒"中"伏毒"的重要组成部分——循环肿瘤细胞(CTC-TJH-01)凋亡的作用机制;初步探索重楼皂苷Ⅶ联合紫杉醇对CTC-TJH-01增殖的影响.方法1.采用CCK-8细胞增殖实验,检测金复康口服液和肺癌治疗常用中药含有的单体化合物:重楼皂苷Ⅶ,熊果酸,蟾毒灵,姜黄素,黄芪甲苷Ⅳ对CTC-TJH-01,H1975,16HBE细胞增殖的影响,评估五种中药单体对肺癌细胞毒作用,从中筛选出最佳中药单体化合物.2.采用流式细胞术,β-半乳糖苷酶染色法检测最佳中药单体化合物重楼皂苷Ⅶ对CTC-TJH-01和H1975细胞株的细胞周期,衰老和凋亡的影响,探索金复康组分重楼皂苷Ⅶ干预CTC-TJH-01和H1975细胞的作用途径.3.采用流式细胞术检测金复康组分重楼皂苷Ⅶ对CTC-TJH-01和H1975细胞线粒体膜电位和细胞内caspase 3/8/9的水平的影响;通过激光共聚焦显微镜观察重楼皂苷Ⅶ对CTC-TJH-01和H1975细胞核及DNA损伤的影响.采用Western Blot检测重楼皂苷Ⅶ干预CTC-TJH-01和H1975后凋亡相关蛋白的变化.探索重楼皂苷Ⅶ诱导CTC-TJH-01和H1975细胞凋亡的分子机制.4.采用CCK-8细胞增殖实验检测不同浓度配比的重楼皂苷Ⅶ联合紫杉醇对CTC-TJH-01细胞毒性作用,评估重楼皂苷Ⅶ联合紫杉醇对CTC-TJH-01细胞增殖的抑制作用是否具有协同效应.结果1.重楼皂苷Ⅶ,熊果酸,蟾毒灵和姜黄素均具有抑制CTC-TJH-01和H1975细胞增殖的作用(P<0.05),随着作用时间延长和药物浓度增加,对细胞增殖的抑制作用逐渐增强.黄芪甲苷Ⅳ对CTC-TJH-01和H1975细胞增殖无显著影响.2.重楼皂苷Ⅶ可将CTC-TJH-01和H1975细胞增殖阻滞在G1期(P<0.05),并诱导其发生凋亡(P<0.001);重楼皂苷Ⅶ可以诱导CTC-TJH-01和H1975细胞线粒体膜电位降低(P<0.05);重楼皂苷Ⅶ对CTC-TJH-01和H1975细胞衰老并无显著作用.重楼皂苷Ⅶ能够诱导CTC-TJH-01细胞核皱缩,核内DNA损伤;未观察到重楼皂苷Ⅶ对H1975细胞核影响.3.重楼皂苷Ⅶ能显著上调CTC-TJH-01和H1975细胞内caspase3/8/9的表达(P<0.05).重楼皂苷Ⅶ可以显著上调CTC-TJH-01细胞内PARP1,γ-H2AX,TNF-R1和DR5蛋白的表达(P<0.05),并下调XIAP和survivin的表达(P<0.05);重楼皂苷Ⅶ可以显著上调H1975细胞内TNF-R1,DR5,Bax的表达(P<0.05),能够显著下调Bcl-2,XIAP,survivin的表达(P<0.05).4.重楼皂苷Ⅶ与紫杉醇以不同比例联用时,对CTC-TJH-01细胞增殖的毒性作用有差异,当按照摩尔浓度比例为(重楼皂苷Ⅶ:紫杉醇)=(2:1)联用时,其对CTC-TJH-01增殖的抑制作用具有协同效应.结论1.金复康组分重楼皂苷Ⅶ可以抑制CTC-TJH-01和H1975增殖;将细胞周期阻滞在G1期,并诱导其发生凋亡.2.重楼皂苷Ⅶ主要通过死亡受体介导的DNA损伤通路诱导CTC-TJH-01细胞发生凋亡,而通过死亡受体介导的线粒体通路诱导H1975细胞发生凋亡.3.当按照摩尔浓度比例为重楼皂苷Ⅶ:紫杉醇=2:1联合应用时,重楼皂苷Ⅶ和紫杉醇对CTC-TJH-01增殖的抑制作用具有协同效应.

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