摘要：

目的:探索两种新型的布鲁顿激酶(BTK)抑制剂泽布替尼(zanubrutinib)和组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂pracinostat在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞中是否具有协同抗肿瘤作用.方法:(1)用浓度为0,2.5,5,10,20,40,80,160μmol/L的单药泽布替尼和浓度为0,15.63,31.25,62.5,125,250,500,1 000,2 000nmol/L的单药pracinostat分别处理NU-DUL-1(ABC型人弥漫性大B淋巴瘤细胞)和SU-DHL-6(GCB型人弥漫性大B淋巴瘤细胞)细胞24,48和72 h后,采用CellTiter-Glo法检测药物对细胞的增殖抑制率,并计算半数抑制浓度(IC_(50)).(2)用浓度为0,5,7.5,10,12.5,15μmol/L的泽布替尼和浓度为0,15.62,31.25,62.5,125,250 nmol/L的pracinostat单药或联合处理NU-DUL-1细胞和SU-DHL-6细胞48 h后,采用CellTiter-Glo法检测药物对细胞的增殖抑制率,在SynergyFinder(https://synergyfinder. fimm. fi)网站选用零相互作用效价模型计算联合用药的协同指数.(3)浓度为0,20μmol/L的泽布替尼和浓度为0,200 nmol/L的pracinostat单药或联合处理NU-DUL-1细胞,浓度为0,20μmol/L的泽布替尼和浓度为0,150 nmol/L的pracinostat单药或联合处理SU-DHL-6细胞,48 h后采用流式细胞术检测药物对细胞凋亡的影响.(4)浓度为0,10,20μmol/L的泽布替尼和浓度为0,100,200 nmol/L的pracinostat单药或联合处理NU-DUL-1细胞,浓度为0,10,20μmol/L的泽布替尼和浓度为0,150,300 nmol/L的pracinostat单药或联合处理SUDHL-6细胞,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白多腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP1),cleaved PARP1,caspase-3,cleaved caspase-3,caspase-8和cleaved caspase-8的表达.结果:(1)泽布替尼和pracinostat可在体外抑制NU-DUL-1细胞和SU-DHL-6细胞增殖且具有时间和剂量依赖性.(2)泽布替尼和pracinostat联用在NU-DUL-1细胞中协同指数为19.553(>10),在SU-DHL-6细胞中协同指数为19.392(>10),两药联合具有明显的协同效应.(3)泽布替尼和pracinostat联合可增强细胞凋亡,联合组细胞凋亡细胞比例较对照组和单药组显著增加(P<0.05).(4)Western blot结果表明,泽布替尼和pracinostat联合增加NU-DUL-1和SU-DHL-6细胞中凋亡蛋白cleaved caspase-3,cleaved caspase-8和cleaved PARP1的表达,诱导细胞凋亡,联合组凋亡蛋白相对表达量较对照组和单药组显著增加(P<0.05).结论:泽布替尼和pracinostat联合可显著抑制NU-DUL-1和SU-DHL-6细胞增殖并促进其凋亡,通过增加凋亡蛋白caspase-3,caspase-8和PARP1的剪切诱导细胞凋亡,发挥协同效应.

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