摘要：

目的:筛选人γδ T细胞识别的肿瘤相关蛋白配体,为深入阐明其抗肿瘤效应机制及用于肿瘤的细胞过继免疫治疗奠定基础.方法:根据实验室前期鉴定并充分验证的具有肿瘤结合特异性的CDR3δ序列合成CDR3δ多肽;并以之为探针,利用生物素-链亲和素系统,筛选人类蛋白质组芯片;表达纯化候选的蛋白配体,用E LISA验证蛋白与探针的结合情况;用流式细胞仪和Western-blot检测蛋白配体在各种乳腺癌肿瘤细胞系的表达情况;并用固相化蛋白配体来扩增人外周血γδ T细胞,为进行蛋白体外刺激γδ T细胞活化增殖及分泌细胞因子的功能验证奠定基础.结果:人工合成具有肿瘤结合特异性的生物素标记的CDR3δ肽OT1,OT3和OT10各5mg;以生物素为对照,筛选人类蛋白质组芯片,共筛选到与之结合的候选蛋白配体共6种,分别是PHF21A,LDB3,SYF2,PPP1R14A,AGR2和SYAP1;通过查询相关数据库对蛋白的功能进行分析,发现AGR2参与调节内质网应激,与乳腺癌的发生发展关系密切;原核表达纯化AGR2蛋白,ELISA结果显示AGR2蛋白能特异性地结合CDR3δ肽OT3,具有剂量依赖性;流式细胞技术和Western-blot结果显示AGR2蛋白在三种乳腺癌细胞系中表达水平不一致,在MCF-7的表达较高,胞内染色阳性达到80%,而在MDA-MB-231和SkBr-3细胞中相对较低,胞内染色阳性为30%;固相包被AGR2蛋白能在体外扩增部分γδ T细胞,与对照具有显著差异.进一步体外功能验证仍在进行中.结论:初步的实验结果表明AGR2可能是人γδ T细胞识别的肿瘤相关蛋白配体,需要进一步验证.

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