摘要：

背景:胰腺癌和肝癌都是全球范围内最致命的恶性肿瘤之一.目前仍迫切需要新的治疗靶点和预后标志物.研究表明,CLCA1在多种肿瘤中可能是一种潜在的抑癌基因.然而,CLCA1在胰腺癌和肝癌中的作用和机制尚有待探索.方法:1)GENT2+GSE数据库分析CLCA1在胰腺癌和正常胰腺中的表达水平,TCGA+GTEx数据库分析CLCA1在肝癌和正常肝脏中的表达水平.2)半定量PCR(RT-PCR)检测胰腺癌和肝癌细胞中CLCA1的m RNA表达水平,定量PCR(q PCR)检测配对的胰腺癌和肝癌组织中CLCA1的m RNA表达水平.免疫组化(IHC)检测配对的胰腺癌和肝癌组织中CLCA1的蛋白表达水平.3)Kaplan-Meier plotter数据库分析CLCA1与肝癌预后的关系.4)RT-PCR,q PCR及蛋白免疫印迹(WB)分别从m RNA和蛋白层面检测CLCA1在胰腺癌和肝癌细胞株中的过表达.5)细胞增殖实验(MTT),平板克隆实验,流式细胞分析,Transwell,裸鼠皮下成瘤,WB,IHC检测CLCA1对肿瘤细胞体内外增殖和转移的生物学影响.6)WB,小管形成实验,免疫荧光(IF),蛋白质免疫共沉淀(Co-IP),蛋白质免疫共沉淀质谱(IP-MS),回复实验,揭示了CLCA1在胰腺癌和肝癌中的抑癌机制.7)药敏实验发现CLCA1对临床化疗药物的增敏特性.结果:1)在线数据库提示CLCA1在胰腺癌和肝癌中低表达.2)CLCA1在人胰腺癌和肝癌组织和细胞中表达缺失,CLCA1的低表达提示肝癌患者的不良预后.3)过表达CLCA1能从体内和体外抑制胰腺癌和肝癌细胞的增殖,可以促进凋亡,可以将胰腺癌细胞(PANC-1和MIA-PACA2)周期阻滞于G2/M期,将肝癌细胞(Hep3B和QGY-7701)周期阻滞于G0/G1期.4)过表达CLCA1可以逆转EMT,抑制胰腺癌和肝癌细胞的迁移和侵袭.5)过表达CLCA1可以抑制胰腺癌细胞株(PANC-1,MIA-PACA2和Colo357)中TMEM16A的表达水平.6)CLCA1与TMEM16A共定位于细胞膜且相互作用.7)IP-MS提示在胰腺癌中CLCA1与Vimentin相互作用并抑制其表达.8)CLCA1抑制肝癌细胞的血管形成.9)对公共数据库的肝癌样本进行分析,KEGG富集到TGF-β和血管形成信号通路.10)CLCA1在肝癌中可以抑制TGFB1和VEGF轴的表达.11)CLCA1与TGFB1,VEGFR2共定位于细胞膜且与它们相互作用.12)回复实验提示CLCA1可以通过CLCA1/TGFB1/VEGFR2级联反应抑制肝癌血管形成.13)在胰腺癌中,CLCA1可以增强胰腺癌细胞对紫杉醇的化疗敏感性;在肝癌中,CLCA1可以使肝癌细胞对索拉菲尼增敏.结论:CLCA1在胰腺癌和肝癌中表达缺失,恢复CLCA1的表达后可抑制肿瘤的增殖和转移.在胰腺癌中,CLCA1可以分别与TMEM16A,Vimentin相互作用并下调它们的表达,并且有可能通过抑制CLCA1/TMEM16A/Vimentin轴来抑制胰腺癌的转移.在肝癌中,CLCA1与VEGFR2相互作用并在胞膜上抑制其表达来抑制血管形成,CLCA1也可以与TGFB1相互作用并通过抑制CLCA1/TGFB1/VEGF级联反应来抑制胞核中VEGFR2的表达从而抑制血管形成.CLCA1可以增强胰腺癌细胞对紫杉醇的化疗敏感性,可以使肝癌细胞对索拉菲尼增敏,体现CLCA1具有潜在的临床转化价值.

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