摘要：

第一部分:MSCs来源外泌体改善脑缺血再灌注损伤:系统评价和Meta分析目的:通过系统评价和Meta分析的方法探讨间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)来源的外泌体与脑缺血再灌注损伤的关系,为MSCs来源的外泌体治疗脑缺血再灌注损伤提供理论依据.方法:通过检索CNKI中国知网,维普中文科技期刊全文数据库,万方数据库,中国生物医学文献数据库,Pub Med,Web of Science,Embase和Cochrane图书馆,检索时间为2012年1月至2022年8月.以"外泌体","细胞外小泡","再灌注损伤"和"间充质干细胞"为主题词,采用主题词和自由词相结合的方式进行检索.两位独立研究者根据纳入和排除标准对文献进行筛选,并使用SYRCLE's动物实验偏倚风险评估工具对研究质量进行质量评估.采用Review Manager 5.3软件对提取的数据进行Meta分析.PROSPERO注册号为CRD42022312227.结果:根据检索策略,初始检索共检索出1116篇文献,根据纳入及排除标准,最终纳入24篇文献.研究质量得分均在3～9分之间,总分为10分.Meta分析结果显示,MSCs来源的外泌体能有效减轻神经功能障碍评分(SMD:-2.11,95%CI:-2.51 to-1.70),减少脑梗塞体积(SMD:-3.76,95%CI:-4.22 to-3.29)和脑含水量(SMD:-2.45,95%CI:-3.25 to-1.65),减轻神经细胞凋亡(SMD:-4.14,95%CI:-4.78 to-3.50).此外,MSCs来源的外泌体组较对照组Caspase-3蛋白水平降低(SMD:-5.40,95%CI:-6.55 to-4.24)及炎性因子TNF-α(SMD:-2.60,95%CI:-3.23 to-1.96),IL-1β(SMD:-2.57,95%CI:-3.27 to-1.86),IL-6(SMD:-2.28,95%CI:-2.90 to-1.65)表达减少.结论:MSCs来源的外泌体对改善脑缺血再灌注损伤具有重要意义,是治疗缺血性脑卒中的新方向.第二部分:骨髓间充质干细胞外泌体改善脑缺血再灌注损伤的机制研究目的:本研究旨在探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)外泌体miR-345-3p和TRAF6在脑缺血再灌注损伤中的作用.方法与材料:分离骨髓间充质干细胞及外泌体.采用流式细胞术,茜素红染色和油红O染色鉴定骨髓间充质干细胞;采用纳米颗粒跟踪分析仪,透射电子显微镜和Western Blot对外泌体粒径大小,形态及表面标记物进行鉴定.首先对大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞进行培养并建立糖氧剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)模型.(1)将培养的细胞分为对照组,OGD/R组和BMSCs-Exos组,OGD/R组和BMSCs-Exos组进行OGD/R处理,并用CCK-8,TUNEL染色和乳酸脱氢酶染色检测各组,评估BMSCs-Exos对脑缺血再灌注损伤的保护作用.(2)将培养的细胞分为对照组,OGD/R组,Exo-NC组,ExomiR-345-3p过表达组和Exo-miR-345-3p抑制组,除对照组外,其余各组细胞均进行OGD/R处理.通过RT-q PCR,Western blotting等方法检测评估BMSCs-Exos是否通过miR-345-3p抑制OGD/R诱导的神经细胞凋亡.(3)双荧光素酶报告实验证实miR-345-3p与TRAF6之间的靶向作用.将培养的细胞分为对照组,OGD/R组,Exo-miR-345-3p mimic oe-NC组,Exo-miR-345-3p mimic oe-TRAF6组,除对照组外,其余各组细胞均进行OGD/R处理.采用RT-q PCR,Western blotting等方法进一步评估外泌体miR-345-3p是否通过靶向TRAF6改善脑缺血再灌注损伤.取雄性SD大鼠建立大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型.将大鼠分为Sham组,MCAO组,Exo-miR-345-3p mimic oe-NC组,Exo-miR-345-3p mimic oe-TRAF6组,Sham组不进行MCAO手术.采用改良大鼠神经功能缺损评分,TTC染色,HE染色,RT-q PCR,Western blotting等方法进一步探讨外泌体miR-345-3p是否通过靶向TRAF6改善MCAO大鼠脑缺血再灌注损伤.结果:OGD/R处理后,神经细胞凋亡率显著增加(P<0.05).经BMSCs外泌体处理后,OGD/R诱导的神经细胞凋亡被显著抑制(P<0.05).经外泌体miR-345-3p处理后,OGD/R诱导的神经细胞凋亡被进一步抑制(P<0.05).外泌体miR-345-3p通过下调TRAF6的表达抑制OGD/R诱导的神经细胞凋亡(P<0.05).然而,抑制miR-345-3p的表达加重了OGD/R诱导的细胞损伤(P<0.05).TRAF6过表达逆转了外泌体miR-345-3p抑制OGD/R诱导的神经细胞凋亡(P<0.05).体内动物实验进一步证实miR-345-3p通过靶向TRAF6降低MCAO大鼠神经功能缺损评分,缩小梗塞体积,减轻神经元凋亡(P<0.05).结论:BMSCs来源的外泌体能有效抑制细胞凋亡,改善缺血区神经结构和功能损伤,该作用可能通过miR-345-3p靶向TRAF6介导.图17幅,表12个,参考文献共139篇

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