摘要：

目的:通过采用高脂饮食联合注射异丙肾上腺素+慢性不可预知性应激方法造模,模拟高脂状态的心肌缺血合并抑郁症大鼠模型,使用加味柴胡疏肝散及其拆方对其进行药物治疗.通过检测血脂四项,HE染色法,行为学等方法评价双心病大鼠模型.选取ACE2-Ang(1-7)-MasR轴作为切入点,通过ELISA法检测大鼠血清中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),血管紧张素(1-7)[Ang(1-7)],血管紧张素转化酶2(ACE2)含量及使用Real-time PCR,Westernblot 法检测海马,心脏组织 ACE2,MasR 基因及蛋白表达,以探究加味柴胡疏肝散配伍机理,为加味柴胡疏肝散防治心肌缺血合并抑郁症提供新靶点依据,为中医药临床防治该病提供新思路.实验方法:实验一:将30只SD雄性大鼠随机分为3组:正常组,模型组,药物组(加味柴胡疏肝散组),各组10只.正常组大鼠普食饲养,不予处理;模型组,药物组大鼠皆采用高脂饮食+慢性不可预知性应激法(CUMS)+异丙肾上腺素(ISO)复合方法建立高脂状态的心肌缺血合并抑郁症大鼠模型:造模第一天给予高脂饲料喂养(3%胆固醇,10%猪油,0.2%丙基硫氧嘧啶,0.5%胆酸钠,白糖5%+基础饲料81.3%),同时接受各种未预知的应激,包括行为限制,热激,潮湿垫料,45℃鼠笼倾斜,鼠笼摇晃,昼夜颠倒,冰水游泳,噪音85dB等多种刺激,同一刺激不可连接出现,动物不能预料刺激的发生.于造模第6周开始每日腹腔注射ISO溶液3mg/kg,连续21d.造模共8周.药物组造模第一天至造模结束给予加味柴胡疏肝散治疗,正常组,模型组用等量生理盐水灌胃.造模后结束后行为学观察评价大鼠模型抑郁情况;检测血脂四项观察血脂情况;HE染色法观察心脏组织病理改变.以此评价模型的建立是否成功.实验二:将108只SD雄性大鼠随机分为9组:正常组,模型组,全方组(加味柴胡疏肝散组),祛瘀化痰拆方组,疏肝行气拆方组,健脾养血拆方组,氟西汀组,曲美他嗪组,辛伐他汀组,各组12只.模型组及各药物组造模方法同实验一.造模第一天至结束各药物组给予相应药物治疗.造模结束后ELISA法检测大鼠血清中ACE2,Ang(1-7),AngⅡ水平及使用Real-time PCR,Western blot法检测心脏,海马组织ACE2,MasR基因及蛋白表达.以此为切入点探讨加味柴胡疏肝散及其拆方对高血脂状态的心肌缺血合并抑郁症大鼠ACE2-Ang(1-7)-MasR轴影响研究.结果:实验一:1.一般情况:正常组大鼠眼睛有神,反应灵敏,活动有力,肌肉饱满,体毛光滑,大小便正常.造模后模型组有狂躁,嘶叫,拼命挣脱,四处串动,体重下降明显,食欲不振,慢慢地出现精神萎靡,疲倦乏力,大便烂软,毛色粗糙,舌质黯紫.加味柴胡疏肝散组治疗大鼠明显较模型组状态好转,活跃好动,行动灵活,毛色润泽,大便成形,食欲增加,体重日渐上涨.2.行为学:与正常组比较,模型组大鼠旷场实验中央区域运动时间和距离及站立次数明显降低(P0.05).与模型组相比,加味柴胡疏肝散可降低TC,LDL-C水平,升高HDL-C水平(P0.05).实验二:1.血清AngⅡ,ACE2,Ang(1-7)水平:加味柴胡疏肝散组及其拆方组可降低血清 AngⅡ,ACE2,Ang(1-7)含量,调节 AngⅡ,ACE2,Ang(1-7)的过度表达.2.海马,心脏ACE2,MasR mRNA和蛋白表达:Real-time PCR和WB法检测海马,心脏ACE2,MasR基因和蛋白表达情况,结果显示加味柴胡疏肝散组可上调海马与心脏ACE2,海马MasR mRNA和蛋白表达,下调心脏MasR mRNA和蛋白过度表达.结论:1.本实验通过模拟冠心病与抑郁症临床病因,利用高脂饮食联合注射ISO+CUMS多因素方法造模56天,模型组大鼠行为学自主活动,运动能力,探索欲望下降,高脂血症形成,心脏形态及病理发生改变,成功建立高血脂状态的心肌缺血合并抑郁症大鼠模型.2.加味柴胡疏肝散防治高血脂状态的心肌缺血合并抑郁症可能通过调控海马ACE2,MasR表达,发挥抗氧化应激,保护脑组织细胞,改善抑郁行为绝望状态;通过调控心脏ACE2,MasR表达,发挥抗炎,抗血栓形成,保护心脏组织细胞,改善心肌缺血.多角度调控ACE2-Ang(l-7)-MasR轴,可能是预防和治疗冠心病合并抑郁症的作用机制之一.3.拆方结果表明,各拆方药物组大鼠AngⅡ,ACE2,Ang(1-7),MasR等指标的表达均显示与造模相反趋势的变化,表明各药物对ACE2-Ang(1-7)-MasR轴的异常变化具体调节作用,并且各拆方药物调节这些指标的表达变化贡献程度不同,对全方具有协同作用.

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