摘要：

目的探讨环状RNA-Hsa-0101216(Hsa-circ-0101216)靶向微小RNA-142-3p(miR-142-3p)对胰腺癌细胞增殖,克隆,迁移及侵袭的影响及其分子机制.方法GEO数据库分析筛选胰腺癌中差异表达的miRNAs,构建circRNA-miRNA网络.实时荧光定量PCR法检测5株胰腺癌细胞(BxPC-3,PANC1,MIA PaCa-2,Capan-2,CFPAC-1)和正常胰腺导管上皮细胞(HPNE)Hsa-circ-0101216 mRNA及miR-142-3p表达.将胰腺癌PANC1,Capan-2细胞分为转染Hsa-circ-0101216小干扰RNA组(si-circRNA组),转染无意义阴性序列siRNA组(si-NC组),正常空白对照组(NC组);转染miR-142-3p过表达慢病毒载体组(miR-142-3p mimic组),转染空载质粒组(miR-CON组),共转染Hsa-circ-0101216 siRNA和miR-142-3p模拟物组(si-Hsa-circ-0101216+mimic miR-142-3p组),共转染Hsa-circ-0101216 siRNA和miR-142-3p模拟物阴性对照序列组(si-Hsa-circ-0101216+mimic miR-142-3p-NC组).采用CCK-8法,EdU增殖染色,平板克隆,细胞划痕和Transwell实验检测各组细胞增殖,克隆,迁移及侵袭能力变化.采用蛋白质免疫印迹法检测细胞ERK1,ERK2蛋白表达,采用双荧光素酶报告基因法验证Hsa-circ-0101216和miR-142-3p间的靶向关系.结果GEO分析筛选出胰腺癌细胞中表达显著下调的miR-142-3p,且成功构建Hsa-circ-0101216-miR-142-3p调控网络.BxPC-3,PANC1,MIA PaCa-2,Capan-2,CFPAC-1细胞Hsa-circ-0101216 mRNA表达量分别为5.64±0.34,5.93±0.40,5.66±0.14,5.63±0.33,5.70±0.50,显著高于HPNE细胞的1.27±0.06;miR-142-3p表达量分别为1.43±0.12,1.20±0.09,1.60±0.04,1.16±0.25,1.42±0.11,显著低于HPNE细胞的4.69±0.22,差异均有统计学意义(P值均<0.001).其中以PANC1细胞的Hsa-circ-0101216 mRNA表达量最高,Capan-2细胞表达量最低.与NC组及si-NC组比较,si-circRNA组PANC1及Capan-2细胞在24,48,72 h的450 nm处吸光度值(A450值),EdU阳性率,细胞克隆数,迁移率及穿膜细胞数均显著降低;miR-142-3p mimic组PANC1及Capan-2细胞上述时间点的A450值,EdU阳性率,细胞克隆数,迁移率及穿膜细胞数均显著低于NC组与miR-CON组;si-Hsa-circ-0101216+mimic miR-142-3p组PANC1及Capan-2细胞的A450值,EdU阳性率,细胞克隆数,迁移率,穿膜细胞数,ERK1及ERK2蛋白表达量较si-Hsa-circ-0101216+mimic miR-142-3p-NC组显著降低,差异均有统计学意义(P值均<0.001).共转染野生型(WT)Hsa-circ-0101216和miR-142-3p mimic组PANC1及Capan-2细胞的荧光素酶活性显著低于miR-CON+WT组(0.92±0.11比2.33±0.21,0.89±0.08比2.30±0.17),差异均有统计学意义(P值均<0.001),但共转染突变型(MUT)Hsa-circ-0101216和miR-142-3p mimic组PANC1及Capan-2细胞的荧光素酶活性与miR-CON+MUT组间差异无统计学意义.结论Hsa-circ-0101216在胰腺癌细胞中高表达,而miR-142-3p呈低表达;Hsa-circ-0101216可通过靶向miR-142-3p促进胰腺癌细胞增殖,克隆,迁移及侵袭.

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