摘要：

探讨芪芎左归复方干预骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cells, BMSCs)外泌体对衰老大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)大鼠血脑屏障(blood-brain barrier, BBB)的修复作用及抗衰老的作用机制.采用D-半乳糖致衰老法联合线栓法建立衰老MCAO复合模型,实验设青年假手术组,衰老假手术组,模型组,外泌体组,中药干预的外泌体组,使用β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色联合TTC染色评估模型的建立情况,术后2 h及脑缺血再灌注后48,96 h外泌体组及中药干预的外泌体组分别于尾静脉注射相应的外泌体.造模成功后2 h,3 d,7 d进行神经功能缺损评分;第7天通过新物体识别实验检测认知功能,磁共振观察脑梗死体积;伊文思蓝染色评价BBB通透性;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测脑组织中紧密连接蛋白ZO-1,Occludin的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清基质金属蛋白酶(MMP)-9,MMP-2水平;SA-β-gal染色检测衰老细胞情况;反转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测p21 mRNA的表达,实时荧光定量PCR(qPCR)检测端粒相对长度.结果显示,芪芎左归复方干预BMSCs外泌体能显著降低衰老MCAO大鼠脑梗死体积,改善神经功能缺损评分,提高认知功能;并能抑制MMP-2,MMP-9表达,促进紧密连接蛋白ZO-1,Occludin的表达,降低BBB的通透性;同时还能降低p21 mRNA的表达,延长端粒长度,延缓细胞衰老.综上,芪芎左归复方干预BMSCs外泌体可能通过降低MMP-2,MMP-9含量,提高ZO-1,Occludin表达水平来修复BBB,同时其抗衰老机制可能与降低p21 mRNA的表达,限制端粒缩短有关.

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