摘要：

在蛋白质组学研究中,酶的固定化技术与游离酶相比在蛋白质酶解时具有众多的优势:可以实现底物,产物高效分离,有利于提高酶的稳定性,使用效率及降低成本.目前多采用纳米金,微芯片,硅胶材料等固体基质进行酶的固定化,但也存在着诸如容易产生非特异性吸附及渗透性不好,进而影响酶解效率等不足之处.为解决这些难题,我们采用液滴微流控合成技术及RAFT聚合法及ATRP聚合法,制备了一系列聚合物智能型多孔基质材料,构建酶固定化反应器,实现了蛋白样品的高效快速酶解[1-5].首先采用自由基聚合法制备得到了聚合物整体材料酶反应器,将胃蛋白酶及胰蛋白酶分别固定于聚合物整体柱上,实现了与药物损伤DNA相互作用的蛋白质的在线酶解,继而采用氢氘交换质谱方法实现了与药物作用蛋白质的捕获及酶解定性研究;其次,我们还设计合成了聚合物(PS-co-MAn),将磁性纳米颗粒与聚合物相混合,制备得到了磁性聚合物多孔膜型酶反应器.其三,在PS-co-MAn微纳多孔膜基础上键合了温度响应,p H响应的聚合物链,构建了智能响应型酶反应器,实现了临床蛋白样品的高效酶解.研究结果表明:聚合物多孔基质酶反应器具有微纳多孔,且键合了智能响应型聚合物链,在酶解过程中,可以实现pH及温度等的智能调控酶解效率.采用所构建的新型聚合物多孔基质酶反应器,实际样品的酶解效率显著提高,其可重复使用性及稳定性良好.本项研究构建了系列聚合物智能型酶反应器,为今后开发新型微纳多孔基质酶反应器奠定了良好基础,同时也为开展与疾病治疗相关的蛋白序列研究提供了高效的酶解方法.

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