摘要：

本文采用小鼠乳腺癌细胞tsFT210,以细胞周期抑制,细胞凋亡诱导及细胞坏死为活性指标,在考察了海洋来源的放线菌3295和Z_2034a—5生产活性物质的发酵条件的基础上进行了大量生产发酵,对此两菌株发酵产物的抗肿瘤活性成分进行了生物活性筛选.结果表明,菌株3295的环己烷和正丁醇提取部分具有细胞坏死性细胞毒和周期抑制作用;菌株Z_2034a—5的乙酸乙酯提取部分具有G_2/M期周期抑制作用.我们采用活性追踪分离的方法对上述两菌株的抗肿瘤活性成分进行了初步研究. 对上述活性部分采用减压硅胶柱层析,凝胶柱层析(Sephadex LH-20),反相硅胶柱层析和反相制备高效液相(HPLC)等分离手段,从菌株3295分离到2个单体化合物(1～2);从菌株Z_2034a—5分离到6个单体化合物(3～8).利用理化性质和光谱学方法(UV,IR,MS,1D-NMR和2D-NMR)阐述了8个化合物的结构,分别为邻苯二甲酸二丁酯(1),1-(1-甲氧基丙基-2-)3-甲基2-羟基间苯二甲酸酯二聚体(2),肉桂酸甲酯(3),N-[2-(4-羟基苯基)乙基]乙酰胺(4),环(酪氨酸—脯氨酸)(6),5-(1-氨基-1-羰基-3-苯基丙基-2-氨基)-2,4-二羟基戊酰胺(7),季铵盐类生物碱(8).推定了化合物(5)和(8)的结构. 生物活性测试结果表明,化合物(1)对tsFT210小鼠乳腺癌细胞具有显著的诱导细胞凋亡和坏死性细胞毒活性,是菌株3295环己烷提取部分的主要活性成分;化合物(2)随剂量变化具有不同的细胞周期抑制活性,是菌株3295正丁醇提取部分周期抑制的主要活性成分.化合物(3)对tsFT210小鼠乳腺癌细胞具有细胞周期抑制作用(呈剂量依赖性)和细胞坏死作用,化合物(4)具有诱导细胞凋亡活性,化合物(5)具有微弱的坏死性细胞毒活性,化合物(7)对tsFT210小鼠乳腺癌细胞具有显著的G_2/M期抑制作用,化合物(3),(7)是菌株Z_2034a—5乙酸乙酯提取部分G_2/M期抑制作用的主要抗肿瘤活性成分.化合物(8)具 有极强的诱导细胞凋亡和坏死性细胞毒活性.SRB法细胞增殖抑制活性测试结果 表明,化合物(1一8)对tsFT210小鼠乳腺癌温敏型细胞都有细胞增殖抑制作用, 其中化合物(6)在浓度为100咫加L时,有一定的改善tsFTZ10细胞增殖活性, 化合物(8)的活性很强. 本文首次发现化合物(1)和(4)在体外对小鼠乳腺癌温敏型tsFTZ10细胞 有诱导细胞凋亡活性;化合物(3)在体外对小鼠乳腺癌温敏型tsFTZ10细胞有 q舰期抑制活性.化合物(5),(7),(8)为新化合物,有待进一步研究. 本文通过活性追踪分离的方法,成功地分离得到代表菌株3295和22034a一5 次级代谢产物的抗肿瘤活性成分,证明这一模型及筛选方法可以快速准确找到海 洋微生物中的活性成分,是寻找潜在药用价值活性化合物的有效手段. 本项研究工作为进一步开发应用海洋来源放线菌奠定了一定的化学和生物 学基础.

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