摘要：

鱼藤素是从豆科植物中提取的天然黄酮类化合物,是一种潜在的天然抗肿瘤药物,经过多个体内体外实验证明,鱼藤素对多类癌症有化学治疗和化学预防的作用,如肺癌,乳腺癌,胃癌,结肠癌等.鱼藤素可以通过抑制癌细胞增殖,诱导癌细胞凋亡,阻滞癌细胞周期或抑制血管生成来达到对癌症化学治疗或预防的作用. 经过研究发现,鱼藤素可以作用于多个癌症中上调的通路,包括PI3K-AKT通路,MAPK通路,NF-B通路,或一些凋亡抑制蛋白(survivin, XIAP)等.其中,研究者们广泛认可的是PI3K-AKT通路和MAPK通路,这些通路中标志基因的蛋白水平在癌症中上调,鱼藤素可以下调这些基因的蛋白水平.但是鱼藤素是如何调控这些下游通路从而达到抑制癌细胞增殖,诱导癌细胞凋亡的目的,仍未得到完全说明.许多文献报道,FGFR4在多种癌症中上调,且可以激活下游的PI3K-AKT通路,MAPK通路.斑马鱼胚胎在受精后30h内具有和癌细胞相同的细胞快速增殖的特征,所以本文假设FGFR4为鱼藤素上游的作用靶点,通过乳腺癌细胞和模式动物斑马鱼来验证鱼藤素通过调节FGFR4来影响下游的PI3K-AKT通路,MAPK通路,从而达到抑制癌细胞增殖,诱导癌细胞凋亡的作用.本文研究内容如下: (1)鱼藤素可同时抑制依赖荷尔蒙乳腺癌细胞MCF-7和非依赖荷尔蒙的乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长,500nM鱼藤素处理这两株乳腺癌细胞,可明显诱导其凋亡.另外,500nM鱼藤素还可显著抑制乳腺癌细胞的克隆形成,但是鱼藤素对乳腺正常细胞Hs578Bst没有明显的影响. (2)低浓度的鱼藤素可明显抑制斑马鱼的发育,其中200nM鱼藤素处理受精后24h斑马鱼,于受精后30h后观察,发现鱼藤素可完全抑制斑马鱼胚胎的增殖信号,并且诱导斑马鱼胚胎细胞的凋亡. (3)通过Q-PCR和Western Blot的分析,证明500nM鱼藤素可以明显下调乳腺癌细胞和斑马鱼胚胎中FGFR4mRNA的水平,并且可以降低FGFR4蛋白以及PI3K-AKT通路,MAPK通路标志基因的蛋白水平. (4)转染和显微注射实验检测FGFR4过表达对鱼藤素作用的rescue效果,pEGFP-C3-HFGFR4质粒的转染以及pEGFP-C3-ZFGFR4和pEGFP-C3-HFGFR4质粒的注射使乳腺癌细胞MCF-7和斑马鱼胚胎中FGFR4过表达,从而使鱼藤素抑制增殖,诱导凋亡的作用没有空质粒组明显,而且通过免疫印迹法证明了FGFR4的过表达可以恢复pAKT以及pERK这些PI3K-AKT通路,MAPK通路主要成员的蛋白水平. 本文结论如下:鱼藤素可以通过下调FGFR4来调节下游的PI3-AKT通路和MAPK通路主要成员的蛋白水平,从而达到诱导乳腺癌细胞凋亡,抑制斑马鱼胚胎发育的作用.

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