摘要：

L'elastine est la proteine matricielle responsable de l'elasticite des tissus retrouvee dans des tissus soumis a de fortes contraintes mecaniques tels que les poumons, les arteres ou la peau. La degradation de cette proteine lors de processus physiopathologiques produit des peptides bologiquement actifs nommes peptides d'elastine portant le motif GXXPG essentiel a leur activite. Ces peptides regulent diverses fonctions biologiques telles que le chimiotactisme, la synthese de proteases, la proliferation. Tous ces effets dependent de la fixation des peptides d'elastine au complexe recepteur de l'elastine. Ce complexe est compose de trois sous-unites : une proteine peripherique de 67 kDa, l'Elastin Binding Protein (EBP), et deux proteines associees a la membrane, la Protective Protein/Cathepsin A (PP/CA) et la Neuraminidase-1 (Neu-1) de 55 et 61 kDa respectivement. L'activite sialidase de Neu-1 est responsable de l'activation de ERK 1/2 apres fixation des peptides d'elastine au complexe recepteur de l'elastine.Dans cette etude, nous demontrons que l'EBP et les radeaux lipidiques sont colocalises a la membrane plasmique. Nous montrons, de plus, que la destructuration de ces microdomaines aussi bien que leur depletion en glycolipides bloque la signalisation du recepteur. L'utilisation d'un anticorps monoclonal bloquant dirige contre le GM3 montre qu'il est essentiel a la signalisation. Apres traitement par les peptides d'elastine, le contenu cellulaire en GM3 diminue alors que celui en lactosylceramide augmente suggerant une conversion du GM3 en lactosylceramide. L'utilisation de lactose ou de siRNA Neu-1 bloque cette conversion ce qui tend a demontrer que le complexe recepteur de l'elastine est implique dans ce mecanisme. Une analyse par cytometrie en flux confirme cette production de lactosylceramide induite par les peptides d'elastine.L'analyse par spectrometrie de masse mettrait en evidence deux lactosylceramides (C23:0 et C24:1) potentiellement bioactifs dont la synthese chimique a ete entreprise. La purification des radeaux lipidiques par ultracentrifugation differentielle en gradient de saccharose ainsi que leur identification par Dot-blot couple a la fluorescence montre un changement de densite de ces microdomaines apres stimulation par les peptides d'elastine.L'evaluation biologique in vitro de ces lactosylceramides montre qu'ils miment les effets des peptides d'elastine sur l'activation de ERK 1/2, la proliferation et la synthese de MMP-1. Enfin, l'evaluation ex vivo des lactosylceramides demontre une reduction de la zone de tissu cardiaque necrose suggerant un role cardioprotecteur de ces molecules. Ce travail propose un mecanisme original de transduction du signal a la membrane plasmique et nous laisse envisager le complexe recepteur de l'elastine, les peptides d'elastine et le lactosylceramide comme de nouveaux agents therapeutiques potentiels.

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