摘要：

目的: 脂联素是在脂肪组织中特异表达的脂肪因子.有研究发现,肝脏静息状态的星状细胞(hepetic stellate cell,HSC)可以表达脂联素基因,而活化的HSC不表达:脂联素可以维持HSC的静息状态,并可以使已经活化的HSC重新逆转为静息状态.但目前尚无HSC活化过程中脂联素表达动态变化的研究报道.也有研究发现,脂联素能够抑制血小板衍生生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)诱导的HSC增生和转移,减弱转化生长因子β1(transforming growth factor,TGFβ1)的作用,还可以减少TGF β1与结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的... 展开 目的: 脂联素是在脂肪组织中特异表达的脂肪因子.有研究发现,肝脏静息状态的星状细胞(hepetic stellate cell,HSC)可以表达脂联素基因,而活化的HSC不表达:脂联素可以维持HSC的静息状态,并可以使已经活化的HSC重新逆转为静息状态.但目前尚无HSC活化过程中脂联素表达动态变化的研究报道.也有研究发现,脂联素能够抑制血小板衍生生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)诱导的HSC增生和转移,减弱转化生长因子β1(transforming growth factor,TGFβ1)的作用,还可以减少TGF β1与结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的基因表达,说明脂联素可能通过抑制促肝纤维化形成因子的合成而抑制肝纤维化,提示脂联素对于肝纤维化的治疗有重要意义.但脂联素对于细胞外基质(Extracellular Matrix,ECM)特别是基质金属蛋白酶类(Matrix Metalloproteinases,MMPs)和金属蛋白酶组织抑制因子(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase,TIMPs)等表达的影响尚无报道. 本研究观察脂联素基因随原代HSC活化表达的动态变化,外源性脂联素对HSC增殖的影响,以及脂联素作用下原代HSC合成和表达MMP2,MMP13,TIMP-1和COL-1等的变化,以期进一步阐明脂联素对肝纤维化的影响. 材料和方法: 1.采用胶原酶原位循环灌流法分离大鼠原代HSC. 2.采用MTT法观察不同浓度脂联素对HSC增殖的影响. 3.采用荧光定量PCR方法检测脂联素基因随原代HSC活化表达的动态变化. 4.分别用荧光定量RT-PCR,ELISA检测MMP2(matrix metalloproteinases-2),MMP13(matrix metalloproteinases-13),TIMP-1(Tissue inhibitor of metalloproteinase-1)和I型胶原(Collagen-1,COL-1)的mRNA表达及蛋白分泌情况;Western-Blot方法检测MMP13和TIMP-1的蛋白表达情况;明胶酶谱法检测HSC分泌的MMP-2活性. 结果:1.0,62.5μg/L,125μ/L,250μg/L,500μg/L,1000μg/L,2000μg/L,4000μg/L脂联素处理HSC细胞24小时,HSC细胞增殖减少.随脂联素浓度增高,HSC存活率明显下降.HSC存活率与脂联素浓度呈线性相关(OR=0.828).根据实验结果选取0,125μg/L,250μg/L,500μg/L为下一步实验浓度. 2.随原代HSC培养时间延长,HSC逐渐由静息态转变为活化状态,α-SMA表达逐渐增高,脂联素基因表达则随培养时间延长而进行性降低. 3.125μg/L,250μg/L和500μg/L脂联素处理原代HSC后,MMP2 mRNA水平均显著增高;HSC分泌MMP2蛋白量亦增加.明胶酶谱检测细胞培养液中MMP2的酶活性,与对照组相比脂联素处理组MMP2酶活性明显高于对照组. 4.不同浓度脂联素处理原代HSC 24h后,MMPl3 mRNA水平均显著增高.当脂联素浓度为250μg/L和500μg/L时,与对照组相比,HSC分泌MMPl3量及HSC细胞内MMPl3蛋白量显著增高;低浓度脂联素处理组MMPl3蛋白表达较对照组低. 5.125μg/L,250μg/L,和500μg/L,脂联素处理HSC后,TIMP-1 mRNA水平显著降低.500μg/L脂联素处理组,TIMP-1蛋白分泌量与对照组相比显著增高.125μg/L脂联素处理组,TIMP-1蛋白表达水平较对照组增高,随着脂联素浓度的增高,HSC细胞内TIMP-1蛋白量逐渐下降,500μg/L脂联素处理组TIMP-1蛋白表达水平显著低于对照组. 6.250μg/L或500μg/L脂联素处理组COL-1 mRNA水平较对照组明显减低,随浓度增加,作用更加显著.125μg/L和500μg/L脂联素浓度处理HSC,COL-1蛋白分泌明显减少. 结论: 1.脂联素随原代HSC活化,表达进行性减少;外源性脂联素能够呈剂量依赖性抑制HSC的增殖. 2.脂联素可增加HSC MMP2及MMPl3的基因表达,增加其蛋白合成与分泌,提高细胞外MMP2的活性:同时抑制TIMP-1基因及蛋白的表达,但可能有利于TIMP-1的蛋白分泌. 3.脂联素可抑制HSC COL-1基因表达和分泌. 收起

展开