摘要：

人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)有100多型别,根据与致癌性的关系分为高危型和低危型.高危型HPV与人类多种组织恶性肿瘤密切相关,尤其以HPV16,18,31,45,52和58型感染与宫颈癌的发生关系最为密切,其中HPV16占50%以上. 本论文针对HPV开展了以下三方面的研究:(1)利用荧光素酶基因为报告基因与含有HPV6,16,18,31,45,52和58型L1,L2衣壳蛋白基因的真核表达质粒共转染293FT细胞,获得带有荧光素酶基因的七种假病毒,建立了针对七种亚型中和抗体的快速,灵敏,准确的检测方法.(2)利用HPV6,16,18,31,45,52,58等七种真核表达质粒免疫小鼠,考察七种亚型间中和抗体交叉保护情况,结果显示:HPV6,HPV16和HPV18免疫血清对HPV52与HPV58假病毒中和阻断率小于24.1%(p0.05);HPV58免疫血清对几种假病毒的中和阻断率分别为:HPV6(86.1%,p0.01),HPV16(30.9%,p0.05),HPV18(60.2%,p0.005),HPV45(36.1%,p0.05)和HPV52(11.7%,p0.05).(3)根据中国部分地区和世界范围内相关流行病学研究结果,同时结合中和抗体交叉保护的关系,确定HPV16和58型为中国地区疫苗设计主要型别.分别利用大肠杆菌表达系统和毕赤酵母(Pichia Pastoris)表达系统表达HPV16和58型的L1蛋白,其中原核表达体系表达的L1经过变性和复性过程,可形成L1五聚体;酵母表达体系分泌表达L1蛋白,可形成病毒样颗粒(Virus Like Particles,VLPs),直径约为50nm.免疫动物结果显示:HPV16和58型两种形式疫苗均可产生中和抗体;在免疫血清阻断假病毒感染的能力和疫苗免疫原性方面,病毒样颗粒疫苗优于五聚体疫苗. 本论文研究结果为进一步研制适合中国和东亚地区的HPV预防性疫苗奠定基础.

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