摘要：

马兰(Kalimeris indica (L.) Sch-Bip),菊科马兰属植物,全草药用,有清热解毒,消食积,利小便,散瘀止血之效,野生资源异常丰富.民间常作为保肝明目的保健食品大量食用.传统中医用其入药治疗乙型肝炎,临床效果显著.全叶马兰(Kalimeris integrifolia Turcz.ex DC.)为菊科马兰属植物,是马兰的近缘种植物,味苦,性寒,具有清热解毒,止咳,散瘀止血的功效.目的:研究马兰及其近缘种抗免疫性肝损伤的物质基础,为寻找具有抗免疫性肝损伤活性的先导化合物奠定基础.方法:干燥的全叶马兰地上部地上部分13 Kg,80%乙醇回流提取,提取液减压浓缩后得流浸膏后(2.56 Kg),首先采用正相硅胶分段,然后综合运用正相硅胶,反相硅胶,Sephadex LH-20葡聚糖凝胶,中压制备以及高相液相制备等多种色谱技术进行纯化和分离,并运用NMR,MS,UV,IR等多种现代波谱技术对分离所得单体化合物进行结构鉴定;并且分别研究了响应面分析法优化马兰总黄酮的提取工艺,大孔树脂纯化马兰总黄酮的工艺及马兰黄酮部位和全叶马兰黄酮部位的抗免疫性肝损伤的动物实验.结果:从全叶马兰的地上部分中分离得到20个单体化合物,分别为表木栓醇(1),24-乙基-7,22-胆甾二烯-3-酮(2),木栓酮(3),丁香脂素(4),α-菠菜甾醇(5),刺五加酮(6),丁香酸(7),Kalinturflavone A (8),Kalinturflavone B (9),东莨菪内酯(10),罗布麻宁(11),4,5-二甲氧基-3-羟基苯乙酮(12),芹菜素(13),5-羟甲基糠醛(14),豆甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷(15),Kalinturoside A (16), Bidenoside C(17),枸橼苦素(18),Iirioresinol A (19),丁香脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(20),其中化合物8,9,16为新化合物,所有化合物均为首次从该植物中分离得到.通过响应面分析法得出马兰总黄酮的最优提取工艺条件为:乙醇浓度40%,液料比16.5:1,提取时间2 h,提取次数3次,在该条件下,马兰总黄酮提取量预测值为162.538 mg,实际验证值为156.867 mg,并得出各因素对马兰总黄酮提取量的影响大小依次为乙醇浓度料液比提取次数提取时间.对上样液浓度,洗脱速率,上样量,洗脱乙醇浓度及用量等工艺参数进行考察后得出大孔树脂纯化马兰总黄酮最佳的工艺参数:HPD-300的吸附量为5.64mg·mL"-1,解析率为82.54%,在8种大孔树脂中均为最高值;最佳上样浓度为0.1 g.mL-1,最佳上样流速为2 ml·min-1,最大上样量为0.239 g生药·mL-1,最佳洗脱乙醇浓度及用量分别为90%和2倍柱体积.动物实验显示,模型组指标数据与正常组比较,均有极显著性意义,并且通过各组数据之间的统计分析发现,TFK和TFKT能降低免疫性肝损伤小鼠血清过高的ALT,AST,NO,TBiL,AKP,MDA,TNF-α,IFN-γ, IL-4,iNOS水平,对抗SOD活性降低,升高GSH-Px水平,提示TFK和TFKT具有保护免疫性肝损伤小鼠的作用.

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