摘要：

蟾酥在我国已有上千年的应用历史。最近研究发现，蟾酥主要成分之一蟾毒灵 （bufalin简称BF）具有选择性地诱导人白血病细胞分化和凋亡的作用，并可恢复临 床上耐维甲酸白血病细胞对维甲酸的敏感性，与其它抗肿瘤药合用，可提高肿瘤细 胞对抗肿瘤药物的敏感性。但蟾毒灵具有很强的强心作用，剂量小，治疗指数窄， 影响了它的使用。本文旨在将蟾毒灵制成脂质体（Liposome，L），利用脂质体具有 靶向和降低毒性的特点，探索将蟾毒灵用于抗肿瘤的可能性。 蟾毒灵系采用硅胶G柱层析法从蟾酥氯仿提取物中分离而得，并经~(13)C-NMR和 ~1H-NMR进行了结构确证。 采用薄膜法分别制备了蟾毒灵阳离子、阴离子及中性脂质体。发现于磷脂中加 入改变脂膜电性的其他成分对蟾毒灵的包封率、渗漏及脂质体的粒径无明显影响。 DSC研究表明，胆固醇（Chol）、十八胺（OA）、二硬脂酰磷酸甘油（DSPG） 及BF均使磷脂酰胆碱（phosphocholine，PC）脂膜主相转变温度变宽，向低温方向移 动。~(31)P-NMR谱图表明，未经超声波处理的PC脂膜，BF可降低PC脂膜的流动性， 呈凝胶相特征。PC双分子层膜经超声波处理后可形成脂肪链由内向外翻转的单层小 囊泡，呈六晶相特征。BF可加速上述过程，可能是由于BF的存在减弱了PC分子 间的作用力，从而使PC脂膜更易受外力作用的影响。固体~(13)C-NMR谱解析表明， BF与PC可产生较强的相互作用。25℃时BF可使PC分子中甘油骨架碳原子及胆碱 与磷原子相连的两个碳原子核磁共振峰消失，BF也使PC脂肪链远离羧基端的3个 碳原子以及近羧基端的3个碳原子核磁共振峰发生明显的强度变化，影响碳链的转 动。上述实验结果说明BF可能插入到PC双分子层脂膜中，超声波处理改变了PC 脂膜的结构。 PC-BF-Chol-L、PC-BF-OA-L、PC-BF-DSPG-L三种荷电性不同的蟾毒灵脂质体 及BF对HL-60细胞生长抑制的IC_(50)分别为2.5×10~(-8)M、1.6×10~(-8)M、2.0×10~(-8)M、 2.O×10~(-8)M。BF浓度为1×10~(-7)M时三种脂质体及BF可完全抑制HL-60、U937细胞的 生长，而1×10~(-8)M BF对HL-60、U937细胞的生长抑制率分别为17.2％和18.6％。表 明PC-BF-OA-L对HL-60细胞生长的抑制作用最强，PC-BF-DSPG-L次之， PC-BF-Chol-L较差。蟾毒灵产生细胞毒作用的浓度范围很窄在1×10~(-7)～1×10~(-8)M。 妇毒灵脂质体的研究 IIL－60细胞经PC－BF－Chol－L、PC－BF－OA－L、PC．BF－DSPG－二及BF以不同浓度 处J‘ill 24小f 以及厂 IX10“＊M BF处理不同lj问，PC．BFChol．L、PC－BFOA1 ＠导 HL60细胞凋亡的效果较PC－BFDSPG＊与BF稍弱。细胞周期分析表明，三利：脂质 体和 BF均使 HL60细胞阻止在 G。－M期。DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示，浓度为 IX10”‘M的 BF和 BF三种月质体处理 HL－60自0 15刁时·以及 l。10刁M向 BF f［IBF 三刊。脂质体处理HL－60纫胞24小时，HL－60细胞DNA呈现明显的梯状条带门adder）， 为凋亡细胞＊NA的典型特征。提示蜡毒灵对H卜6O细胞生长的抑制仆J！I足其血过沥 导细胞程序化死亡（即凋亡）来实现的。 HL－60细她经卜 10｛M禾 IXIO”gM的 PC－BF－DSPG－L与 BF处理 3天，通过 NBT 还原能力的测定，计算分化细胞的百分数。结果表明，lx10“gM的 l。C．BF．DSPG．L 与 BF诱导 HL－60细胞分化的百分数分别为 sl．60和 78．3O，IX10－‘M BF没有进一步 提高HL－60细胞分化的百分数。 小鼠腹腔单次注射赡毒灵及赡毒灵脂质体，其LDS。值分别为1石4O．5叫．8）sg从g ＊2＊8（Z．43～Z．95）＜＊＊，两者相差1＊3倍，具有显著性差异（P＜0＊1）。赡毒灵 O＊3。ng／吨及峭毒灵脂质体口．5＊mg／g0等毒齐迢对小鼠＊训s月癌（皮下栓中D。〕的 抑瘤率分别为 39．130＄［146．740（P＜0．05），赡鸯灵脂质体优于蜡毒灵；以等剂量 0．u＞旮咋相比，抑瘤率分别为39．门％和枯．84％（P＞0．05）。赡毒灵脂质体可以降低 赡毒灵的毒性和提高抗肿瘤效果。

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