摘要：

近年来,两亲性嵌段聚合物自组装制备载药粒子备受关注.这种方法工艺简单并且可以减少甚至避免使用表面活性剂,易于工业化生产.羟基喜树碱(HCPT)是一种吲哚类生物碱,它能通过抑制拓扑异构酶Ⅰ而抑制肿瘤细胞的增殖,为广谱抗肿瘤药物.目前,临床上使用的HCPT主要剂型为注射用水针剂,这种开环的羧酸盐因其临床疗效低,半衰期短等缺点限制了该制剂的应用. 本文以MePEG-PLGA为药物载体,以闭环HCPT为模型药物,采用改良的透析法自组装载羟基喜树碱的纳米粒,并考察其制备优化条件,体外释放性能及细胞毒性.采用SPG膜板法可控自组装了载羟基喜树碱的"彗星"状MePEG-PLGA-HCPT粒子,考察其形成机理,体外释放性能及细胞毒性.研究结果如下:(1)采用改良的透析法成功自组装了MePEG-PLGA-HCPT纳米粒.以粒径和载药率为评价标准.进行制备条件优化实验.优化后的最佳条件为采用丙酮作为溶剂,透析袋截留分子量(MWCO)为14000 D,透析温度为25 ℃,透析初始含水量1 %,透析外水相pH=4.0,聚合物浓度为3 mg/mL,载体中的PEG含量15 %,载体中的LA含量为100 %,HCPT与MePEG-PLGA投料质量比1:5.根据优化实验结果,对优化条件下制备的MePEG-PLGA-HCPT纳米粒的粒径,Zeta电位,载药量,包封率,形态,HCPT的存在状态及分布进行鉴定.结果表明:MePEG-PLGA-HCPT纳米粒为实心球形壳核结构,表面圆滑,粒径分布均一,分散性好,平均粒径为120.1 nm,多分散系数为0.057,Zeta电位为-31.2 mV.MePEG-PLGA-HCPT纳米粒的载药量为7.417 %,包封率为44.5 %,且HCPT以晶体形状态均匀分布于纳米粒中.优化条件下制备的MePEG-PLGA-HCPT纳米粒在三种pH条件下的体外释放分为突释和缓释两部分,且随着释放介质pH值的上升,纳米粒释放速率加快.(2)MTT试验表明:纳米粒组和HCPT纯药物组对肝癌细胞均有一定程度的杀伤作用且其抑制率呈现明显药物浓度依赖性,其中载药纳米粒组具有较强的抑瘤作用且抑瘤效果优于纯药组.此外,激光共聚焦荧光显微镜技术证明了载药纳米粒能有效的被Bel-7402细胞摄取,且摄取量与载药纳米粒的浓度有关.(3)采用两亲性嵌段聚合物MePEG-PLGA为载体结合SPG模板法成功制备了自组装"彗星"状载药粒子.载药粒子在电镜下呈"彗星"状,其中头部螺旋成束,尾部为散开的纳米束.头部直径大小与SPG膜孔径相当,尾部纳米束散开幅度与制备时氮气压力大小成反比.确定了载药粒子的最佳工艺:即HCPT与MePEG-PLGA的质量比为1:1,氮气压力为100 kPa,SPG膜孔径为1.1 μm;本研究制备的载药粒子的载药量可达到48.3 %,包封率可以达到96.6 %,Zeta电位-31.4 mV.药物以无定形态均匀分布于MePEG-PLGA粒子中.对于"彗星"状载药粒子的形成机理提出了蠕虫模式组装体假说.体外释药试验表明"彗星"状MePEG-PLGA-HCPT载药粒子具有药物缓释的优点,且药物释放的速度随着载药率的增加而增大.这种形貌的载药粒子相对于球形载药粒子有可能对肝癌细胞Bel-7402的生长和增殖抑制作用更强.

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