摘要：

本论文研究工作是采集青岛胶州湾近海海底沉积物样品,在实验室内进行放线菌菌 株的分离,研究所分离放线菌的代谢产物,以寻找有生物活性的先导化合物。利用抑菌 筛选模型,得到两株能产生强抑菌活性代谢产物的菌株 M045 和 M048。 对菌株 M045 进行了 6 种培养基共 24 个培养条件的优化,通过生物活性筛选、化 学筛选以及活性跟踪,确定了利用鱼粉—面粉培养基作为发酵培养基,起始 pH 值为 6.5,发酵温度是 35°C 的产活性代谢产物的最佳发酵条件。进行 15 l 规模的发酵,得到 14 g 粗提物。经过硅胶层析、薄层层析以及 Sephadex LH-20 分子筛层析,纯化得到三个 化合物。进行质谱、核磁共振氢谱和碳谱以及二维核磁共振光谱测定,确定三个化合物 的结构,manumycin A (1) 90 mg,是已知结构化合物,chinikomycin A (2) 130 mg 和 chinikomycin B (3) 10.5 mg 是两个新结构化合物。选择大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草 杆菌(Bacillus subtilis ATCC 6051)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、链霉菌 Tü57(Streptomyces viridochromogenes Tü 57)、白色假丝酵母菌(Candida albicans)、毛霉菌 Tü284(Mucor miehei Tü 284),以及三株微藻(Chlorella vulgaris, Chlorella sorokiniana, Scenedesmus subspicatus) 作为受试微生物,进行单体化合物活性复筛。结果显示 manumycin A (1)表现出抑菌活性,chinikomycin A (2)和 B (3)不具有抑菌活性,而活性跟 踪过程中,组分一直具有活性,分析原因是 manumycin A (1)的活性。对新结构化合物进 行抗肿瘤活性筛选,结果显示 chinikomycin A (2)抑制乳腺癌(MAXF 401NL, IC50 = 2.41 μg/ml)、黑色素瘤(MEXF 462NL, IC50 = 4.15 μg/ml)和肾肿瘤(RXF 944L, IC50 = 4.02 μg/ml) 细胞的增殖,chinikomycin B (3)对乳腺癌 MAXF 401NL (IC50 = 3.04 μg/ml)肿瘤细胞有抑 制作用。 对菌株 M048 进行了 5 种培养基共 15 个培养条件的优化,通过生物活性筛选、化 学筛选以及活性跟踪,确定了利用豆粉培养基作为发酵培养基,起始 pH 值为 7.8,发酵 温度是 28°C 的产活性代谢产物的最佳发酵条件。进行 25 l 规模的发酵,得到 11 g 粗提 物。利用各种层析技术,纯化得到 10 个化合物。经过各种光谱测定,并且同化合物数 据库(DataBase, H. Laatsch)进行比较,确定了它们的结构。已知结构化合物 7 个,它 i WP=3 们是 iodinin (4) 75 mg,1,6-dihydroxyphenazine (5) 34 mg,genistein (6) 6 mg,daidzein (7) 50 mg , N-acetylquestiomycin A (9) 85 mg , questiomycin A (11) 3 mg , 1,6- diacetylphenazine (13) 26 mg,新结构化合物 3 个,它们是 chandrananimycin A (10) 6 mg,chandrananimycin B (12) 2mg 和 chandrananimycin C (8) 2 mg 。选择 9 种受试微生 物进行抗微生物实验,结果显示,均表现出一定的抑菌活性,尤其是新化合物 Chandrananimycin C (8),具有广的抑菌谱和强的抑菌效果。对 3 个新结构化合物进行抗 肿瘤活性筛选,它们的 IC70均低于 1.4 μg/ml,具有抗肿瘤活性。 论文最后进行了菌株 M045 和 M048 的初步菌种鉴定,形态观察,生理生化特征培 养以及 16S rDNA 序列测定并构建进化树,结果表明,M045 属于链霉菌属,在基因种 上,非常接近链霉菌 Streptomyces griseoaurantiacus DSM 40430 ;M048 是拟诺卡氏菌 T 属中的达松维尔拟诺卡氏菌(Nocardiopsis dassonvillei)。

展开