RNA干扰maspin基因对胃癌细胞株MKN-28凋亡的影响
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摘要：
目的:构建maspin基因编码区的shRNA真核表达载体,探讨转染重组质粒对胃癌细胞株MKN-28凋亡的影响。 方法: 1.设计合成针对maspin基因的shRNA与具有荧光蛋白表达的pGenesil-1.1质粒连接,构建的重组质粒分别命名为阳性质粒pGenesil-maspin1、pGenesil-maspin2和阴性质粒pGenesil-HK。 2.分别用RT-PCR和Western blot检测转染重组质粒前后MKN-28细胞maspin、Bcl-2、Bax的表达变化。 3.流式细胞术检测转染重组质粒细胞后MKN-28细胞周期变化和细胞凋亡。 结果: 1.经凝胶电泳、DNA测序分析,成功构建maspin特异性shRNA重组质粒pGenesil-maspin1、pGenesil-maspin2及pGenesil-HK。 2.RT-PCR和Western blot显示阳性质粒pGenesil-maspin转染成功后可明显下调胃癌细胞株MKN-28 maspin的表达水平(P<0.05)。 3.RT-PCR和Western blot显示阳性质粒转染组Bcl-2表达水平上调(P<0.05),而Bax表达水平下调(P<0.05)。 4.流式细胞术显示阳性质粒转染组的细胞周期呈现G0/G1期细胞减少(P<0.05),细胞凋亡率减少(P<0.05)。 结论: 1.成功构建pGenesil-maspin1、pGenesil-maspin2质粒表达载体, 2.构建的重组质粒pGenesil-maspin经转染能有效抑制人胃癌细胞株MKN-28 maspin基因的表达。 3.构建的重组质粒pGenesil-maspin转染胃癌细胞株MKN-28可抑制细胞凋亡,推测转染外源性maspin shRNA基因能下调maspin基因的表达从而抑制胃癌细胞的凋亡,与细胞周期分布的改变有关,作用的分子机制可能与上调Bcl-2和下调Bax的基因表达有关。
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DOI：
CNKI:CDMD:2.2009.230274
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