摘要：

宫颈癌是最常见的妇女生殖器恶性肿瘤之一,在全球发病率居女性恶性肿瘤的第四位,严重威胁女性健康.在发展中国家,宫颈癌占女性癌症死亡病例的60%以上.高危型人乳头瘤病毒(high risk human papillomavirus,HR-HPV)的感染是宫颈癌及其癌前病变的主要发病原因.尽管宫颈癌的预防及治疗方法在不断提高和发展,筛查仍然是防控宫颈癌及癌前病变的主要手段,提高宫颈癌患者生存率关键在于早发现,早治疗.近年来,随着"精准医疗"这一概念的提出,人们正致力于寻找一些新的肿瘤标志物用于宫颈癌的早期诊断和靶向治疗.细胞因子白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)是一种重要的细胞因子,具有多种功能.人体内多种细胞可产生此因子,如巨噬细胞,淋巴细胞等免疫细胞,IL-10与多种肿瘤如肝癌,胃癌,结肠癌,乳腺癌等相关,在宫颈病变的发展过程中IL-10同样也发挥了重要作用.在我们课题组既往研究工作中,发现与HPV E6/E7 mRNA阴性患者相比,HPV E6/E7 mRNA阳性患者阴道灌洗液中IL-10水平是升高的,这提示阴道局部免疫状态与宫颈癌的发生发展过程有密切关联.研究表明IL-10介导的JAK1/TYK2/STAT3通路在细胞增殖,分化与凋亡中起重要作用,MMP-9作为一个典型的侵袭相关因子,可由STAT3调控其转录及表达.但在宫颈细胞中,IL-10是否可通过此通路影响细胞生物学功能进而影响宫颈病变我们尚不清楚.目的探究IL-10因子在不同程度宫颈病变患者的阴道灌洗液和宫颈组织中的表达水平,并检测上调IL-10对HcerEpic细胞生物学功能的作用及是否可影响JAK1/TYK2/STAT3通路上关键因子的表达水平,研究IL-10与宫颈病变进展的相关性及其作用机制.材料与方法1材料选取2018年12月-2019年6月于郑州大学第三附属医院住院行手术治疗的宫颈病变患者的宫颈组织,包括:宫颈低级别鳞状上皮内瘤变(low-squamous intraepithelial lesion,LSIL)30例,宫颈高级别鳞状上皮内瘤变(high-squamous intraepithelial lesion,HSIL)30例,宫颈鳞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)60例,并收取同期因子宫肌瘤行全子宫切除术患者的正常宫颈组织共30例.同时收集以上患者术前阴道分泌物,宫颈脱落细胞及阴道灌洗液.各组年龄差异无明显统计学意义.LSIL,HSIL及CSCC组纳入标准:(1)临床资料完善;(2)经我院有经验病理医师明确诊断为LSIL,HSIL或宫颈鳞癌;(3)术前均未曾接受过放疗及化学治疗.正常宫颈组(对照组)纳入标准:(1)因子宫肌瘤行子宫切除术者;(2)HPV E6/E7 mRNA宫颈薄层液基细胞学检查结果未见异常;(3)宫颈病理结果未见明显异常.各组排除标准:(1)同时合并其他部位恶性肿瘤病史者;(2)合并严重的心,肺,肾,脑等疾病;(3)妊娠期及哺乳期患者.所有标本均经本院阅片经验丰富的病理科医师证实,保证所有患者对本实验知情并同意,本实验课题已经我院医学伦理委员会批准.2方法1.收集上述患者的宫颈脱落细胞,并立即转移至我院病理科进行HPV E6/E7mRNA检测,同时收集患者阴道分泌物至我院检验科进行阴道分泌物分析,并计算阴道微生态失衡率.2.分别采用ELISA实验及免疫组化法分析各组患者阴道灌洗液及宫颈组织中IL-10表达水平.3.以pcDNA3.1此质粒为载体,分别构建IL-10过表达质粒(pcDNA3.1-IL-10)及空载体质粒,并将其转染至正常宫颈上皮细胞HcerEpic中,采用q RT-PCR技术检测转染后两组细胞mRNA的水平,采用CCK-8实验,平板划痕实验和transwell小室实验分别分析IL-10对正常宫颈细胞HcerEpic增殖,迁移和侵袭功能的影响,使用Western blot法检测JAK1/TYK2/STAT3通路上这三个因子及下游侵袭相关因子MMP9水平的变化.4.在过表达IL-10的正常宫颈上皮细胞HcerEpic中加入JAK1/TYK2抑制剂PF06700841,分别检测加入抑制剂后细胞增殖及迁移侵袭能力,并检测STAT3,MMP9表达水平.结果1.随着宫颈病变程度加重,HPV E6/E7 mRNA阳性率及阴道微生态失衡率升高.2.IL-10因子在正常宫颈组,LSIL组,HSIL组及CSCC组患者的阴道灌洗液及宫颈组织中表达水平均逐步增高.3.携带有pcDNA3.1-IL-10的HcerEpic细胞较空白载体组增殖率上升,迁移及侵袭能力增强,且此组细胞中JAK1,TYK2,STAT3及MMP9较空白载体组表达升高.4.在过表达IL-10的正常宫颈上皮细胞中加入JAK1/TYK2抑制剂PF06700841后,细胞增殖及迁移侵袭能力降低,STAT3及MMP9因子表达水平下降.结论1.随着宫颈病变级别增加,IL-10在患者阴道灌洗液及宫颈组织中表达水平逐步增高.2.过表达IL-10后,正常宫颈上皮细胞HcerEpic的生物学功能包括增殖,迁移及侵袭能力明显增强,而加JAK1/TYK2抑制剂后,IL-10的上述作用被阻断.3.阴道微环境中IL-10因子可能通过激活JAK1/TYK2/STAT3通路从而促进正常宫颈上皮细胞HcerEpic增殖功能,并增强其迁移及侵袭能力.

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