摘要：

目的:研究刺参酸性粘多糖(SJAMP)对人肝癌HepG2细胞的凋亡诱导作用,观察SJAMP对于肝癌细胞线粒体凋亡通路的影响并探讨其可能的作用机制. 方法:体外培养HepG2细胞及张氏肝细胞,以张氏肝细胞作为正常细胞参照组,将0.25μg/mL,1.0μg/mL,4.0μg/mL的SJAMP分 别作用于HepG2细胞及张氏细胞一段时间后,透射电镜观察细胞结构的变化,荧光显微镜观察刺参酸性粘多糖对细胞内钙离子浓度的变化,流式细胞术检测线粒 体膜电位,免疫细胞化学法检测Bcl-2家族中Bax及Bcl-2蛋白,抗凋亡蛋白生物素Survivin,第二线粒体Caspse家族激活蛋白 Smac,细胞色素C(Cytc),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达,荧光定量PCR(Real-time PCR, RT-PCR)检测Bax,Bcl-2,Cytc以及Caspase-3mRNA表达. 结果: 1,透射电镜下观察发现,SJAMP作用后的HepG2细胞出现凋亡现象,染色体发生固缩,核膜消失等形态学改变;而张氏细胞与HepG2空白对照组并不表现出凋亡等相关形态学改变. 2,荧光显微镜下观察细胞内钙离子结果显示:与空白对照组相比,随着SAJMP作用剂量的增加,HepG2细胞内钙离子荧光IOD值逐渐降低,各组间的差 异具有显著性(P<0.05);而张氏细胞内钙离子荧光IOD值并没有随着SJAMP剂量的增加而改变,各组间的差异没有统计学意义(P>0.05). 3,流式细胞仪检测结果显示:与空白对照组相比:随着SJAMP作用剂量的增加,各HepG2细胞组内的线粒体膜电位逐渐下降,各组间的差异具有显著性 (P<0.05);而张氏细胞线粒体膜电位并没有随着SJAMP剂量的增加而改变,各组间的差异没有统计学意义(P>0.05). 4,免疫细胞化学结果表明:与空白对照组相比:随着SJAMP作用剂量的增加,HepG2细胞内Bax,Cytc,Smac以及Caspase-3蛋白的 表达逐渐增强,且Bcl-2和Survivin蛋白的表达被抑制,各组间的差异具有显著性(P<0.05);而张氏细胞Bax,Bcl-2,Cytc, Smac,Survivin以及Caspase-3蛋白的表达并没有随着SJAMP作用剂量的增加而改变,各组间的差异没有统计学意义(P>0.05). 5,实时定量RT-PCR结果显示:与空白对照组相比,随着SJAMP作用剂量的增加,HepG2细胞内Bax,Cytc和Caspase-3 mRNA的表达量逐渐升高,而Bcl-2基因mRNA表达的量逐渐降低,各组间的差异具有显著性(P<0.05);而张氏细胞线Bax,Bel-2, Cytc和Caspase-3 mRNA的表达量并没有随着SJAMP剂量的增加而改变,各组间的差异没有统计学意义(P>0.05). 结论: 1,SJAMP可诱导人肝肿瘤HepG2细胞发生凋亡. 2,SJAMP可通过抑制Bcl-2及Surviving和促进Bax,Cytc,Caspase-3以及Smac基因和蛋白的表达,激活线粒体介导的凋亡通路,从而促进癌细胞凋亡; 3,SJAMP对人正常肝细胞-张氏细胞生长及线粒体凋亡途径相关基因和蛋白表达没有影响.

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